讓專業(yè)人員告訴你使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板時(shí)一定要注意哪些事

更新時(shí)間：2021-08-03

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細(xì)胞計(jì)數(shù)板是一種常用的細(xì)胞計(jì)數(shù)工具，醫(yī)學(xué)上常用來計(jì)數(shù)紅細(xì)胞、白細(xì)胞等而得名，也常用于計(jì)算一些細(xì)菌、真菌、酵母等微生物的數(shù)量，是一種常見的生物學(xué)工具。

細(xì)胞計(jì)數(shù)板的注意：

鏡檢計(jì)數(shù)室。因前一次清洗不到位，或者保存過程中存在污染，更或者因操作不當(dāng)導(dǎo)致的計(jì)數(shù)室存在劃痕，若不及時(shí)清洗或更換，則會(huì)對(duì)后期實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)產(chǎn)生極大影響。所以，在每次使用血球計(jì)數(shù)板之前都需要加一步鏡檢計(jì)數(shù)室，如若在鏡檢時(shí)發(fā)現(xiàn)計(jì)數(shù)室有污物，則需按要求清洗并吹干后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

搖勻后取液。在吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，需輕輕震蕩試管，使菌體分布均勻，防止聚沉淀，從而提高計(jì)數(shù)的代表性和準(zhǔn)確性。

先蓋血蓋片后加菌液。在菌懸液搖勻后，應(yīng)先在血球計(jì)數(shù)板上蓋上血蓋片，再用滴管吸取少許菌懸液，從計(jì)數(shù)區(qū)中間平臺(tái)沿血蓋片的上邊緣滴入一小滴菌懸液，利用液體的表面張力一次性充滿計(jì)數(shù)區(qū)。若先加菌液再覆蓋血蓋片，則容易因?yàn)榫杭尤脒^多，而導(dǎo)致血蓋片未與血球計(jì)數(shù)板支持柱接觸，血蓋片浮于菌液上方而導(dǎo)致最后計(jì)數(shù)偏大，同時(shí)會(huì)因?yàn)橛袣馀莓a(chǎn)生而導(dǎo)致計(jì)數(shù)偏小。

靜置片刻再計(jì)數(shù)。靜置5min，待菌懸液不再漂浮流動(dòng)，酵母菌全部沉降后再將血球計(jì)數(shù)板放到顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。先在低倍鏡下找到需要觀察計(jì)數(shù)的大方格及中方格，將中方格移到視野中央，然后撥動(dòng)轉(zhuǎn)換器移至高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。

高倍鏡下調(diào)亮度。低倍鏡下，用平面鏡和小光圈，可以清晰地看到血球計(jì)數(shù)板上的酵母菌。但是，撥動(dòng)轉(zhuǎn)換器換到高倍鏡后，即使是用了平面鏡和最小光圈，視野里往往還是白茫茫一片，什么都看不見，這時(shí)候可以嘗試操作遮光器上的金屬遮光片進(jìn)行遮光處理。因?yàn)榛畹慕湍妇团囵B(yǎng)液的折光率相近，所以要在高倍鏡下將視野調(diào)得暗一些。

掌握計(jì)數(shù)原則。一般選擇觀察的菌液濃度控制在每個(gè)小方格內(nèi)有4或5個(gè)菌體為宜，若其濃度太高，可適當(dāng)稀釋；并采用“計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右”的計(jì)數(shù)原則。

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